IFRS1大鼠雪旺細(xì)胞
Catalogue No : C1448
Product Format : a T25 flask
Culture Properties： 貼壁
Complete Growth Medium : 89%H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
Atmosphere : air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application : Cells and cancer research
NOTE : FOR RESEARCH USE ONLY
Operation steps for cell culture：
1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞；
2. 吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；（細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細(xì)胞完全漂浮?；靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3. 加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；
4. 將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例 : 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
Cell cryopreservation：
1. 凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）
2. 降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存。
Tips：
1. 細(xì)胞經(jīng)過(guò)運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時(shí)碎片比較少，傳代時(shí)可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
2. 細(xì)胞生長(zhǎng)不均時(shí)，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3. 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢時(shí)，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（最高不超過(guò)20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時(shí)間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞完全漂浮?？蛻?hù)消化過(guò)度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長(zhǎng)緩慢，不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶(hù)先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時(shí)聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶(hù)同時(shí)復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
6. 細(xì)胞狀態(tài)正常時(shí)，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測(cè)凍存效果。我方不對(duì)客戶(hù)凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé)，客戶(hù)凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
Notice：
客戶(hù)收到細(xì)胞有任何疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)致電我們，細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒(méi)有任何電話(huà)，或其他形式回訪(fǎng)，默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒(méi)問(wèn)題，之后出了任何問(wèn)題不給予免費(fèi)售后。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā)，細(xì)胞收貨時(shí)已經(jīng)死亡或密度不足的除外。
用戶(hù)評(píng)論(共6條評(píng)論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專(zhuān)業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶(hù)提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購(gòu)買(mǎi)本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購(gòu)買(mǎi)本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類(lèi)和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類(lèi)、激素類(lèi)）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶(hù)標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶(hù)手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開(kāi)展不同層次的密切合作，以雙贏(yíng)求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶(hù)取材前須向我司銷(xiāo)售人員索要說(shuō)明書(shū)，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類(lèi)標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶(hù)須知：
客戶(hù)應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶(hù)提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶(hù)承擔(dān)。
為什么要進(jìn)行細(xì)胞系的STR鑒定
什么是細(xì)胞系鑒定？
所謂細(xì)胞系鑒定即通過(guò)
STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后，細(xì)胞系可以通過(guò)定期的檢測(cè)，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。
為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定？
首先進(jìn)行細(xì)胞系
STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)進(jìn)行，據(jù)估計(jì)，15-20%的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來(lái)的細(xì)胞系，或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然，細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯(cuò)誤，將會(huì)極大的威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此，很多細(xì)胞庫(kù)現(xiàn)在都要對(duì)提交來(lái)的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定，并對(duì)細(xì)胞系之間的交叉污染進(jìn)行監(jiān)測(cè)。
什么細(xì)胞最容易污染別的細(xì)胞？
Hela細(xì)胞。五十多年來(lái)，Hela細(xì)胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究，對(duì)當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功，是名副其實(shí)的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時(shí)很多被廣泛研究的細(xì)胞系都被Hela細(xì)胞淹沒(méi)，因?yàn)樗L(zhǎng)得快，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個(gè)培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞突然長(zhǎng)得很好，而以后都用它傳代做實(shí)驗(yàn)的話(huà)，十之八九是搞錯(cuò)了。
早在1967年，遺傳學(xué)家StanleyGartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT407這兩種細(xì)胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細(xì)胞系——Hela細(xì)胞。
有哪些細(xì)胞曾被
Hela污染？
lnt-407、HEp-2、WISH（人羊膜細(xì)胞）、Acc-M（人原發(fā)性延腺癌細(xì)胞）、Bcap-37
（人乳腺癌細(xì)胞）、HAC-84（人肺腺癌克?。epatoma（人肝癌細(xì)胞）、HUL-42（人肺腺癌細(xì)胞）、CNE（人鼻咽癌細(xì)胞）、SPC-A-1（人肺腺癌細(xì)胞）、Tca-8113（人舌鱗癌細(xì)胞）、YTMLC（個(gè)舊肺鱗癌細(xì)胞）等一百余種。
如何進(jìn)行細(xì)胞系鑒定？
細(xì)胞系鑒定目前主要基于國(guó)際身份認(rèn)證委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，可以通過(guò)多重?zé)晒?/font>
PCR技術(shù)，對(duì)人源8個(gè)STR位點(diǎn)以及1個(gè)性別決定位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)。我公司做的STR 鑒定，除以上9個(gè)位點(diǎn)之外，將對(duì)檢測(cè)細(xì)胞加做12個(gè)其它位點(diǎn)信息。
什么時(shí)候需細(xì)胞系鑒定？
1）當(dāng)建立或獲得一個(gè)新的細(xì)胞系時(shí)；
2）一個(gè)涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開(kāi)始/結(jié)束時(shí)；
3）在細(xì)胞凍存之前，或細(xì)胞已連續(xù)培養(yǎng)2～3個(gè)月時(shí)；
4）發(fā)表文章或申請(qǐng)課題經(jīng)費(fèi)前；
5）細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時(shí)；
6）當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用超過(guò)一種細(xì)胞系時(shí)，所有細(xì)胞系應(yīng)先鑒定以排除交叉污染的可能。
如何提供鑒定樣本？
我公司建議客戶(hù)對(duì)每種進(jìn)行檢測(cè)的目的細(xì)胞復(fù)蘇好
T25培養(yǎng)瓶寄送活細(xì)胞，或者對(duì)每種需要進(jìn)行檢測(cè)的細(xì)胞單獨(dú)收集在1.5ml離心管中，細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個(gè)。細(xì)胞需要離心沉淀，并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基，沉淀進(jìn)行冰凍（干冰）保存與寄送。（推薦復(fù)蘇好T25培養(yǎng)瓶常溫寄送活細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個(gè)）
如何知道細(xì)胞系是否發(fā)生交叉污染了？
如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染，而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時(shí)，那么在進(jìn)行
STR位點(diǎn)檢測(cè)的時(shí)候，多個(gè)位點(diǎn)會(huì)出現(xiàn)兩個(gè)以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號(hào)強(qiáng)度，理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此，存在交叉污染的混合細(xì)胞系中，其中一個(gè)位點(diǎn)中某些峰會(huì)明顯高于其他的峰，其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個(gè)主要細(xì)胞系，而小峰則屬于那個(gè)次要細(xì)胞系。值得注意的是，當(dāng)發(fā)生兩個(gè)或以上細(xì)胞混合的時(shí)候，檢測(cè)結(jié)果看起來(lái)非常像細(xì)胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個(gè)細(xì)胞系存在亞群時(shí)，尤其是一些癌細(xì)胞系，由于遺傳不穩(wěn)定的存在，在一些位點(diǎn)的STR特性會(huì)不同。因此經(jīng)驗(yàn)豐富的分子專(zhuān)家是非常重要的，他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜（STR峰圖），從而判斷是否由于發(fā)生細(xì)胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。
如何根據(jù)
STR數(shù)據(jù)判斷細(xì)胞系的身份？
收到細(xì)胞系鑒定結(jié)果以及
STR信息，可以與參考數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)。如果細(xì)胞樣本的每個(gè)STR位點(diǎn)和參考細(xì)胞STR位點(diǎn)都能重合匹配，即說(shuō)明該細(xì)胞系正確，反之則說(shuō)明你的細(xì)胞系可能被錯(cuò)誤標(biāo)記，交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說(shuō)來(lái)，匹配度≥80%即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確，匹配度＜80%則說(shuō)明該細(xì)胞系的來(lái)源需要被懷疑。
提 示 :
如果細(xì)胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯(cuò)誤標(biāo)記，則需要拿更早代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，從而找到問(wèn)題的起源或者直接從可靠的機(jī)構(gòu)購(gòu)買(mǎi)一株新的細(xì)胞系。
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