磺胺喹惡啉檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書
（酶聯(lián)免疫法）
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1 原理及用途
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法檢測(cè)組織、血清、蜂蜜、牛奶、尿液、飼料等樣本中的磺胺喹惡啉藥物（SQX），試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的磺胺喹惡啉藥物和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗磺胺喹惡啉藥物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含磺胺喹惡啉藥物含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中磺胺喹惡啉藥物的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，45min～15min
2.3 檢測(cè)下限：
組織（高檢測(cè)限方法）……………0.5ppb
組織（低檢測(cè)限方法）……………2.5ppb
血清、尿液…………………………2ppb
蜂蜜…………………………………0.5ppb
牛奶…………………………………10ppb
飼料…………………………………20ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
磺胺喹噁啉（SQX）………………………100%
磺胺嘧啶（SD 或 SDZ）……………………＜1%
磺胺甲基嘧啶（SM1）……………………＜1%
磺胺二甲基嘧啶（SM2）……………………＜1%
磺胺間甲氧嘧啶（SMM）……………………＜1%
2.5 樣本回收率：
組織、蜂蜜………………………95±25%
尿樣、牛奶、血清、飼料……………85±25%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96 孔
標(biāo)準(zhǔn)液：各 1ml
0ppb、0.5ppb、1.5ppb、4.5ppb、13.5ppb、40.5ppb高標(biāo)準(zhǔn)液（紅蓋）：1ppm…………1ml
酶標(biāo)記物（紅蓋）…………………5.5ml
抗體工作液（藍(lán)蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X 濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
2X 復(fù)溶液（黃蓋）…………………50ml
說(shuō)明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量 0.01g）
4.2 微量移液器：?jiǎn)蔚?20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑：乙酸乙酯、正己烷、乙腈、Na2HPO4·12H2O、NaOH 、
濃HCL 、NaH2PO4·2H2O
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知：
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液：
配液 1：0.2M NaOH 溶液
0.8gNaOH 用去離子水 100ml 溶解
配液 2：0.02M PB 緩沖液
稱取 2.58g Na2HPO4·12H2O 和 0.44g NaH2PO4·2H2O 加去離
子水 500ml 溶解。
配液 3：0.5M 鹽酸溶液
4.3ml 濃 HCL 加入去離子水定容至 100ml 混勻。
配液 4：復(fù)溶液
將2×復(fù)溶液用去離子水 2 倍稀釋(1 份復(fù)溶液加 1 份去離子水)，用于樣本的復(fù)溶，復(fù)溶液在 4℃環(huán)境可保存一個(gè)月。配液 5:工作洗滌液
將濃縮洗滌液 20 倍稀釋(1 份洗滌液加 19 份去離子水)。
5.3 樣本前處理步驟：
5.3.1 組織樣本（高檢測(cè)限）處理方法
1）稱取 3±0.05g 均質(zhì)組織樣本置離心管中，加入 3ml 0.02M PB 緩沖液充分振蕩混勻，再加入 4ml 乙酸乙酯和 2ml 乙腈，充分振蕩 10min，于 4000r/min 以上速度離心 10min；
2）移取 2ml 上層液體（約相當(dāng)于 1g 的樣本）在 50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/span>
3）加 1ml 正己烷溶解干燥的殘留物，再加 1ml 復(fù)溶液，強(qiáng)烈振蕩 1min，4000r/min，離心 5min；
4）除去上層正己烷，取下層水相 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1 檢測(cè)下限：0.5ppb 5.3.2 組織樣本（低檢測(cè)限）處理方法
1）稱 2.0±0.05g 均質(zhì)組織樣本于離心管中；加入 8ml 0.02M PB 緩沖液，震蕩 2min，4000r/min 以上離心 10min；
2）取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 5 檢測(cè)下限：2.5ppb 5.3.3 血清樣本處理方法
1）將血樣本于室溫放置 30min，于 4000r/min 以上離心 10min，分離出血清或過(guò)濾血清；
2）取 1ml 血清，加入 3ml 0.02 M PB 緩沖液混合，混合 30s；
3）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：4 檢測(cè)下限：2ppb 5.3.4 蜂蜜樣本處理方法
1）稱取 1±0.05g 蜂蜜樣本于 50ml 離心管中，加入 1ml 0.5M 鹽酸置于 37℃環(huán)境中 30min；
2）加入 2.5ml 0.2M 氫氧化鈉 (將 PH 值調(diào)至 5 左右)再加入 4ml 乙酸乙脂振蕩 5min，4000r/min 以上室溫離心 10min；
3）取 2ml 上層液體于 50-60℃下氮?dú)獯蹈?，?0.5ml 已稀釋好的復(fù)溶液復(fù)溶，混合 30s；
4）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：1 檢測(cè)下限：0.5ppb 5.3.5 尿樣本處理方法
1）用 3ml 0.02 M PB 緩沖液與 1ml 經(jīng)離心后的清亮尿樣本混合，混合 30s；
2）取 50µl 液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 4 檢測(cè)下限：2ppb 5.3.6 牛奶樣本處理方法
1）將牛奶樣本用 0.02 M PB 緩沖液 20 倍稀釋（如 20µl 牛奶
+380µl 0.02 M PB 緩沖液），混合 30s；
2）取 50µl 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：20 檢測(cè)下限：10ppb 5.3.7 飼料樣本處理方法
1）稱取 2.0±0.05g 飼料樣本至 50ml 聚苯乙烯離心管中，加入8ml 乙腈，振蕩 5min，室溫 4000r/min 以上離心 5min；
2）移取 1ml 上層有機(jī)相至 10ml 潔凈干燥玻璃試管中，在50-60℃氮?dú)饣蚩諝獯蹈桑?/div>
3）加入 1ml 正己烷，用渦旋儀渦動(dòng) 30s，再加入 1ml 0.2M 磷酸鹽緩沖溶液，用渦旋儀渦動(dòng) 30s 混勻，轉(zhuǎn)入 2ml 聚苯乙烯離心管中，室溫 4000r/min 以上離心 5min；
4）除去上層有機(jī)相，移取 100ul 下層水相至 2ml 離心管中，加入 900ul 0.2M 磷酸鹽緩沖溶液，用渦旋儀渦動(dòng) 1min，混勻；5）取 50ul 用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：40 檢測(cè)下限：20ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。
6.1 編 號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物 50µl/孔，再加入 50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃反應(yīng) 45 分鐘。
6.3 洗 滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液 250µl/孔充分洗滌 5 次，每次間隔 30 秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯 色：每孔加入底物液 A 50µl，再加底物液 B 50µl，輕輕振蕩 5 秒混勻，25℃避光顯色 15 分鐘（若藍(lán)色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間）。
6.5 終 止：每孔加入終止液 50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。
6.6 測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于 450nm 處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng) 450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后 10 分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以 100%，即
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線
上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（歡迎來(lái)電索?。?/p>
8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫（25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0 標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于 0.5 個(gè)單位（A450nm< 0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為 1 年，生產(chǎn)日期見包裝盒。
酶聯(lián)生物經(jīng)過(guò)不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊(duì)。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對(duì)血清及其它樣本定量檢測(cè)抗原，定性檢測(cè)特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測(cè)的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢(shì)。
ELISA檢測(cè)技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測(cè)抗原 2、間接法檢測(cè)抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測(cè)。
以上代測(cè)費(fèi)，凡購(gòu)買本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測(cè)！
凡購(gòu)買本公司目錄任何一種酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，您只需將需要檢測(cè)的動(dòng)物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
Pig……）種類和檢測(cè)指標(biāo)（白介素類、激素類）及標(biāo)本數(shù)量（48T/96T）通知公司業(yè)務(wù)員即可。在接到客戶標(biāo)本當(dāng)日起，現(xiàn)貨產(chǎn)品一周內(nèi)將檢測(cè)報(bào)告交到客戶手中！
歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國(guó)檢測(cè)事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測(cè)的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測(cè)，對(duì)收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測(cè)的標(biāo)本，及時(shí)儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請(qǐng)?jiān)炷Ｈ〔暮?，將?biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測(cè)放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說(shuō)明書，具體操作注意事項(xiàng)請(qǐng)與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時(shí)需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號(hào)；2、所測(cè)項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對(duì)所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
詳解七個(gè)農(nóng)藥殘留的檢測(cè)操作流程
一、樣品采集
1. 在進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)前，首先需要進(jìn)行樣品采集，樣品可以是農(nóng)產(chǎn)品、土壤、水、空氣等，在采集前需要根據(jù)檢測(cè)要求確定采樣點(diǎn)和采樣方法，并記錄采樣時(shí)間、地點(diǎn)和數(shù)量等相關(guān)信息，
2. 檢測(cè)第一步，也是最關(guān)鍵的一步，采集的樣品應(yīng)具有代表性，能夠真實(shí)反映農(nóng)產(chǎn)品的整體情況，同時(shí)，采集過(guò)程中要注意避免交叉污染，確保樣品的純凈性。
二、樣品前處理
1. 對(duì)于生物樣品（如農(nóng)產(chǎn)品等），需要進(jìn)行樣品前處理，以去除影響檢測(cè)結(jié)果的雜質(zhì)和干擾物。樣品前處理通常包括樣品分離、萃取和凈化等步驟，可以采用溶劑萃取、固相萃取、液液分配等方法進(jìn)行。
2. 采集回來(lái)的樣品需要進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，如破碎、勻漿等，以便后續(xù)的提取和分析，處理過(guò)程中要注意操作規(guī)范，避免對(duì)樣品造成污染或損失。
三、提取農(nóng)藥殘留
通過(guò)特定的提取劑和方法，將農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留提取出來(lái)，為后續(xù)的分析做好準(zhǔn)備。
四、凈化與濃縮
提取出的農(nóng)藥殘留可能含有雜質(zhì)，需要進(jìn)行凈化處理。同時(shí)，為了提高檢測(cè)靈敏度，還需要對(duì)提取液進(jìn)行濃縮。
五、檢測(cè)方法
農(nóng)藥殘留檢測(cè)方法主要包括物理檢測(cè)方法和化學(xué)檢測(cè)方法。物理檢測(cè)方法包括顯微鏡檢測(cè)、紫外光檢測(cè)等，但這些方法僅能檢測(cè)到存在于樣品表面的農(nóng)藥殘留?；瘜W(xué)檢測(cè)方法包括色譜法、質(zhì)譜法、光譜法等，具有高靈敏度、高準(zhǔn)確性和高特異性等優(yōu)點(diǎn)。
六、注意事項(xiàng)
進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)時(shí)，需要注意4個(gè)事項(xiàng)：
1. 樣品收集、保存和運(yùn)輸要求嚴(yán)格，避免污染和變質(zhì)。
2. 在操作中要注意自身防護(hù)，避免接觸有毒有害物質(zhì)。
3. 樣品前處理和檢測(cè)方法需要根據(jù)樣品特性進(jìn)行優(yōu)化和調(diào)整，避免誤差和干擾。
4. 樣品分析前需要進(jìn)行質(zhì)控和檢測(cè)方法驗(yàn)證，以保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠。
七、解決方案
針對(duì)不同的農(nóng)藥殘留檢測(cè)需求，可以采用不同的解決方案，有些實(shí)驗(yàn)室提供農(nóng)藥殘留分析服務(wù)，可以根據(jù)樣品特性和檢測(cè)要求，進(jìn)行針對(duì)性的檢測(cè)方案和操作流程，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，同時(shí)，一些農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)也提供農(nóng)藥殘留檢測(cè)服務(wù)，可以提供有針對(duì)性的解決方案和專業(yè)的技術(shù)支持，在操作中需要嚴(yán)格按照樣品采集、前處理和檢測(cè)方法等環(huán)節(jié)進(jìn)行操作，并注意安全防護(hù)和質(zhì)控措施，選擇合適的解決方案和技術(shù)支持，可以提高檢測(cè)效率和準(zhǔn)確性。
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