中文名稱 : 人慢性B細(xì)胞白血病細(xì)胞
產(chǎn)品名稱 : MEC-1
基本形態(tài) : 淋巴母細(xì)胞樣
培養(yǎng)條件 : IMDM+10%FBS+1%P/S生長特性懸浮生長
培養(yǎng)環(huán)境 : 37℃，5%CO2，95%AIR
備 注 : 如為凍存管，為保存細(xì)胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請勿直接倒掉培養(yǎng)基
細(xì)胞復(fù)蘇
1、 從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀用 5ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 T25 培養(yǎng)瓶，于 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4、第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞傳代
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次：
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個 T25）， 補(bǔ)充新的完全培養(yǎng)基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
細(xì)胞凍存
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 T25 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；
2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入 1ml/支的凍存液，混勻后加入凍存管中。
（如：凍一支，加入 1ml 無血清凍存液）
4、 將凍存細(xì)胞用程序降溫盒放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小時以上。
本細(xì)胞系僅用于科研使用
用戶評論(共6條評論)
酶聯(lián)生物經(jīng)過不斷的實(shí)驗(yàn)優(yōu)化和改進(jìn)，積累了大量的經(jīng)驗(yàn)，擁有專業(yè)的酶聯(lián)研發(fā)團(tuán)隊。利用專業(yè)的酶聯(lián)免疫技術(shù)自主研發(fā)的elisa試劑盒，能對血清及其它樣本定量檢測抗原，定性檢測特異性抗體。優(yōu)質(zhì)的試劑，先進(jìn)的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。ELISA檢測的方便性、穩(wěn)定性、重復(fù)性和可靠性方面都具有很大的優(yōu)勢。
ELISA檢測技術(shù)服務(wù)內(nèi)容：
1、雙抗體夾心法檢測抗原 2、間接法檢測抗體 3、為客戶提供各種ELISA技術(shù)進(jìn)行樣本檢測。
以上代測費(fèi)，凡購買本公司試劑盒，我們免費(fèi)代測！
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歡迎各科研單位在各種項(xiàng)目上與我們公司開展不同層次的密切合作，以雙贏求發(fā)展，共同進(jìn)步，為中國檢測事業(yè)的發(fā)展積累經(jīng)驗(yàn)。
二、樣本要求
在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。我們提倡新鮮標(biāo)本盡早檢測，對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的標(biāo)本，及時儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，請造模取材后，將標(biāo)本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差，蛋白極易降解，直接影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量，所以避免反復(fù)凍融。代測放免標(biāo)本的客戶取材前須向我司銷售人員索要說明書，具體操作注意事項(xiàng)請與我司技術(shù)人員溝通。
液體類標(biāo)本：標(biāo)本必須為液體，不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等。
血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
血漿：應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，加入10%（v/v）抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
尿液、胸腹水、腦脊液：用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.0-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
三、寄標(biāo)本時需注明以下情況：
1、標(biāo)本編號；2、所測項(xiàng)目；3、是否做復(fù)孔；3、聯(lián)系方式；4、實(shí)驗(yàn)后標(biāo)本是否寄回。
客戶須知：
客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé)，如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
為什么要進(jìn)行細(xì)胞系的STR鑒定
什么是細(xì)胞系鑒定？
所謂細(xì)胞系鑒定即通過
STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后，細(xì)胞系可以通過定期的檢測，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。
為什么要進(jìn)行細(xì)胞系鑒定？
首先進(jìn)行細(xì)胞系
STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進(jìn)行，據(jù)估計，15-20%的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來的細(xì)胞系，或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然，細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯誤，將會極大的威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此，很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定，并對細(xì)胞系之間的交叉污染進(jìn)行監(jiān)測。
什么細(xì)胞最容易污染別的細(xì)胞？
Hela細(xì)胞。五十多年來，Hela細(xì)胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究，對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功，是名副其實(shí)的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細(xì)胞系都被Hela細(xì)胞淹沒，因?yàn)樗L得快，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細(xì)胞突然長得很好，而以后都用它傳代做實(shí)驗(yàn)的話，十之八九是搞錯了。
早在1967年，遺傳學(xué)家StanleyGartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT407這兩種細(xì)胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細(xì)胞系——Hela細(xì)胞。
有哪些細(xì)胞曾被
Hela污染？
lnt-407、HEp-2、WISH（人羊膜細(xì)胞）、Acc-M（人原發(fā)性延腺癌細(xì)胞）、Bcap-37
（人乳腺癌細(xì)胞）、HAC-84（人肺腺癌克?。?、Hepatoma（人肝癌細(xì)胞）、HUL-42（人肺腺癌細(xì)胞）、CNE（人鼻咽癌細(xì)胞）、SPC-A-1（人肺腺癌細(xì)胞）、Tca-8113（人舌鱗癌細(xì)胞）、YTMLC（個舊肺鱗癌細(xì)胞）等一百余種。
如何進(jìn)行細(xì)胞系鑒定？
細(xì)胞系鑒定目前主要基于國際身份認(rèn)證委員會的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，可以通過多重?zé)晒?/font>
PCR技術(shù)，對人源8個STR位點(diǎn)以及1個性別決定位點(diǎn)進(jìn)行檢測。我公司做的STR 鑒定，除以上9個位點(diǎn)之外，將對檢測細(xì)胞加做12個其它位點(diǎn)信息。
什么時候需細(xì)胞系鑒定？
1）當(dāng)建立或獲得一個新的細(xì)胞系時；
2）一個涉及到細(xì)胞試驗(yàn)項(xiàng)目開始/結(jié)束時；
3）在細(xì)胞凍存之前，或細(xì)胞已連續(xù)培養(yǎng)2～3個月時；
4）發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費(fèi)前；
5）細(xì)胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時；
6）當(dāng)實(shí)驗(yàn)室使用超過一種細(xì)胞系時，所有細(xì)胞系應(yīng)先鑒定以排除交叉污染的可能。
如何提供鑒定樣本？
我公司建議客戶對每種進(jìn)行檢測的目的細(xì)胞復(fù)蘇好
T25培養(yǎng)瓶寄送活細(xì)胞，或者對每種需要進(jìn)行檢測的細(xì)胞單獨(dú)收集在1.5ml離心管中，細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個。細(xì)胞需要離心沉淀，并且以PBS清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基，沉淀進(jìn)行冰凍（干冰）保存與寄送。（推薦復(fù)蘇好T25培養(yǎng)瓶常溫寄送活細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)目不少于10的6次方個）
如何知道細(xì)胞系是否發(fā)生交叉污染了？
如果存在細(xì)胞系之間發(fā)生交叉污染，而且鑒定用的細(xì)胞可能有兩種以上的細(xì)胞系時，那么在進(jìn)行
STR位點(diǎn)檢測的時候，多個位點(diǎn)會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強(qiáng)度，理論上峰值與樣本的DNA濃度有直接的關(guān)系。因此，存在交叉污染的混合細(xì)胞系中，其中一個位點(diǎn)中某些峰會明顯高于其他的峰，其中大峰是屬于混合細(xì)胞系中那個主要細(xì)胞系，而小峰則屬于那個次要細(xì)胞系。值得注意的是，當(dāng)發(fā)生兩個或以上細(xì)胞混合的時候，檢測結(jié)果看起來非常像細(xì)胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個細(xì)胞系存在亞群時，尤其是一些癌細(xì)胞系，由于遺傳不穩(wěn)定的存在，在一些位點(diǎn)的STR特性會不同。因此經(jīng)驗(yàn)豐富的分子專家是非常重要的，他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜（STR峰圖），從而判斷是否由于發(fā)生細(xì)胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。
如何根據(jù)
STR數(shù)據(jù)判斷細(xì)胞系的身份？
收到細(xì)胞系鑒定結(jié)果以及
STR信息，可以與參考數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對。如果細(xì)胞樣本的每個STR位點(diǎn)和參考細(xì)胞STR位點(diǎn)都能重合匹配，即說明該細(xì)胞系正確，反之則說明你的細(xì)胞系可能被錯誤標(biāo)記，交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來，匹配度≥80%即可認(rèn)為該細(xì)胞系正確，匹配度＜80%則說明該細(xì)胞系的來源需要被懷疑。
提 示 :
如果細(xì)胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標(biāo)記，則需要拿更早代數(shù)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定，從而找到問題的起源或者直接從可靠的機(jī)構(gòu)購買一株新的細(xì)胞系。
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