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別讓ELISA實(shí)驗(yàn)功虧一簣！從原理到選購，一文教你讀懂酶標(biāo)儀

ELISA實(shí)驗(yàn)的最后一步，決不能功虧一簣！還在擔(dān)心酶標(biāo)儀的突然罷工，讓您數(shù)小時(shí)的心血、珍貴的樣品和試劑瞬間化為泡影嗎？一臺(tái)真正可靠的酶標(biāo)儀，是您獲得精準(zhǔn)數(shù)據(jù)的最后一道保障。它，究竟該是什么樣？       酶標(biāo)儀，即酶聯(lián)免疫檢測儀，用于檢測ELISA反應(yīng)后的吸光度值。它主要由光路系統(tǒng)和信號(hào)采集系統(tǒng)組成。其工作原理為：<o:p></o:p>       1、光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器轉(zhuǎn)變?yōu)橐皇鴨紊?，一部分單色光被?biāo)本吸收，另一部分透射過標(biāo)本照射到光電探測器上；<o:p></o:p>       2、光電探測器將光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)，經(jīng)過一系列的信號(hào)處理后，送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，最后將結(jié)果顯示出來。<o:p></o:p>       微孔板讀數(shù)儀分類<o:p></o:p>       根據(jù)光學(xué)系統(tǒng)的類型，酶標(biāo)儀可分為濾光片式酶標(biāo)儀和光柵式酶標(biāo)儀。<o:p></o:p>       光學(xué)濾光片是一塊涂有光學(xué)薄膜的光學(xué)玻璃板，它可以改變通過濾光片的波長，并分離不需要的波長。根據(jù)選配的濾光片，可以僅截取特定波長進(jìn)行檢測。<o:p></o:p>       光柵式是利用物理衍射光柵的原理，將白光源以不同的角度分光，再通過一系列狹縫分離出選定的激發(fā)波長。光柵酶標(biāo)儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，靈活性更高。<o:p></o:p>       目前，濾波系統(tǒng)由于其價(jià)格相對(duì)便宜、檢測靈敏度高、帶寬選擇性強(qiáng)、濾波器切換速度快等特點(diǎn)，得到了較為廣泛的應(yīng)用。<o:p></o:p>       微孔板讀數(shù)儀選擇<o:p></o:p>       現(xiàn)在您了解了原理，那么如何選擇您喜歡的微孔板讀數(shù)儀呢？可以考慮以下參數(shù)：<o:p></o:p>       1.測量波長<o:p></o:p>       一般酶標(biāo)儀的測量波長在400~750nm之間或800nm，完全可以滿足ELISA的顯色測定。目前常見的ELISA試劑盒所用的標(biāo)記酶主要為辣根過氧化物酶（HRP），底物通常為四甲基聯(lián)苯胺（TMB），在酸性或堿性終止液作用下，最終生成的黃色或藍(lán)色產(chǎn)物的最大吸收波長分別在450-490nm和630-650nm左右，因此可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇儀器。<o:p></o:p>       2.測量吸光度范圍<o:p></o:p>       通常酶標(biāo)儀的吸光度測量范圍在0~2.5之間，可以滿足ELISA的測定要求。早期酶標(biāo)儀能夠測的吸光度一般在0~2.5之間，現(xiàn)在基本已經(jīng)拓寬到3.5以上，并且能夠保持良好的精密度和線性。因此，對(duì)于酶標(biāo)儀的吸光度范圍，不必刻意追求大的吸光度范圍，主要看在一定吸光度范圍內(nèi)的線性和精密度。<o:p></o:p>       3.檢測速度<o:p></o:p>       酶標(biāo)儀的檢測速度是指完成一次比色測定所需的時(shí)間。酶標(biāo)儀的檢測速度快，有助于提高檢測的精度，即避免測定過程中因測定時(shí)間不同而導(dǎo)致每個(gè)微孔之間吸光度的差異。目前市面上常見的酶標(biāo)儀的檢測速度很快，通常在幾秒鐘之內(nèi)。<o:p></o:p>       4.振動(dòng)盤功能<o:p></o:p>       酶標(biāo)儀的搖板功能是指酶標(biāo)儀在進(jìn)行比色測定前，對(duì)酶標(biāo)板的孔板進(jìn)行震蕩混勻，使孔內(nèi)顏色均勻一致。目前市面上常見的酶標(biāo)儀都具備搖板功能，區(qū)別在于搖板的方式，有的可以通過上下、左右或旋轉(zhuǎn)，以及振蕩幅度任意調(diào)節(jié)。使用帶有搖板功能的酶標(biāo)儀進(jìn)行ELISA測定，顯色反應(yīng)完成后加入終止液，無需震蕩混勻，直接放入酶標(biāo)儀進(jìn)行測定即可。<o:p></o:p>       5.軟件功能<o:p></o:p>       軟件功能是指酶標(biāo)儀對(duì)ELISA定性、定量測定以及其他測定方法（如酶標(biāo)動(dòng)力學(xué)、紫外、凝集等）的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和報(bào)告的功能。軟件功能是中高端酶標(biāo)儀非常重要的功能。<o:p></o:p>       軟件可以在讀數(shù)前設(shè)置讀數(shù)孔、波長、計(jì)算公式等，并在讀數(shù)后顯示相關(guān)數(shù)據(jù)。對(duì)于用戶來說，良好的軟件功能將對(duì)實(shí)際工作有很大的幫助。在ELISA定性測定中，如果酶標(biāo)儀存在陽性判斷值（cut-off），而其測定結(jié)果存在“灰色區(qū)域”（即測得的吸光度在cut-off周圍的一定區(qū)域內(nèi)，則該區(qū)域內(nèi)的結(jié)果應(yīng)為“可疑”），統(tǒng)計(jì)計(jì)算功能不僅方便了實(shí)驗(yàn)室工作人員，在某些特定情況下也具有很高的實(shí)用價(jià)值。<o:p></o:p>       回到我們最初的問題：如何避免因酶標(biāo)儀的失誤而讓數(shù)小時(shí)的心血付諸東流？答案就在于正確的認(rèn)知和選擇。希望通過今天的介紹，您對(duì)酶標(biāo)儀的原理和挑選方法有了更清晰的認(rèn)識(shí)。選擇一臺(tái)對(duì)的設(shè)備，不僅是投資，更是為您的珍貴樣品和寶貴時(shí)間上一道保險(xiǎn)。未來，更加智能、可靠的酶標(biāo)儀必將成為您實(shí)驗(yàn)室中值得信賴的伙伴。<o:p></o:p>

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